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双靶点CAR-T的脱靶检测可以采用多种方法,包括MPA试验、组织交叉反应(TCR)和体外细胞杀伤试验等。以MPA试验为例,其检测过程需要根据双CAR的结构策略来进行抗体的合成和开展MPA试验。总体原则是合成的、用于MPA检测的抗体结构要尽量反映T细胞表面表达的CAR的真实结构。例如,如果双CAR是串联在一起的,即它们形成了一个二价串联抗原识别结构,那么可以合成一个类似的二价串联抗体进行MPA检测,来评估CAR-T对不同抗原的特异性结合能力,从而判断其是否存在脱靶效应。如果双CAR是分开的,那么需要分别针对每个靶点,合成含有CAR结构的抗体,然后进行两个独立的MPA检测。