卵巢早衰动物模型

临床的卵巢早衰(POF)是指卵巢功能提前减退，通常表现为女性在40岁以前出现闭经，以闭经、不育、雌激素缺乏以及促性腺激素水平升高为特征。人群发病率约为1%~3%，在继发性闭经中占2%~10%。诊断以闭经持续至少4个月（或半年以上）、排除其他原因为基础。卵巢早衰是妇科内分泌领域的常见病。

POF病因多种多样，具体发病机制尚不清楚。为寻找病因和有效治疗方法，必须建立与人类临床表现和发病机制相似的动物模型。国内外专家学者鉴于POF病因的多样性，建立了不同的动物模型。

1、材料与方法

1.1 实验材料
雌性Wistar大鼠。

1.2 实验动物分组
选用雌性Wistar大鼠40只，体重260~300 g，随机分为正常对照组和实验模型组各20只。

1.3 实验方法
1.3.1 POF大鼠模型制备 实验模型组雌性Wistar大鼠用雷公藤多甙片(10 mg/片)，0.6 mg/(100 g•d)体重，灌胃1次/d，连续9d，建立POF动物模型。

1.3.2 组化标本制备
对实验动物用1％戊巴比妥钠(40ml/kg)腹腔麻醉后开胸，经左心室70滴/min滴入1％肝素钠的生理盐水500ml，同时剪开右心耳。继用0.1m磷酸盐缓冲液(PBS,PH=7.4)配制的固定液(含4％多聚甲醛)灌流固定。取出实验动物的卵巢组织，放入含4％多聚甲醛PBS的固定液中进行后固定大约2h，之后将实验动物的卵巢组织切成薄片移入含20％蔗糖的PBS中。在4℃冰箱中存放，至组织薄片沉底，经水包埋，恒冷箱连续横切片，片厚20μm。经OCT包埋，恒冷箱连续切片，片厚16 μm，-70℃保存备用。

1.3.3 尼氏染色
冷冻切片吹干，经PBS漂洗（5 min×3次），将切片置入1%甲苯胺蓝溶液中37℃孵育90min，取出后用蒸馏水冲洗，PBS漂洗（5 min×3次），梯度乙醇脱水，二甲苯透明，中性树胶封片，光湿微镜下观察。

2、结果

尼氏染色结果:
（1）正常对照组大鼠卵巢的尼氏染色切片上，卵泡数目正常，卵泡无闭锁，间质无明显增生。
（2）实验模型组大鼠卵巢可见卵巢萎缩，卵泡数目减少，卵泡闭锁增多，间质增生明显。
（3）根据尼氏染色结果证明POF动物模型制备成功。

3、讨论

由于POF的病因与发病机制尚不清楚，为寻找有效的治疗方法及探索其发生发展规律，建立切实可靠的POF模型显得尤为重要。从目前各种造模结果来看，药物型POF模型简单可靠、容易操作，可作为研究POF的模型；但由于方法尚不够成熟，需进一步探讨药物剂量与给药时间，以构建最理想的模型。在造模的同时，还需探讨药物对其他器官（如肝、肾、神经系统等）的影响，为临床治疗提供更全面的数据。这对阐明POF发病机制、指导临床安全用药具有更重要的意义。