抗体制备服务公司

2015-10-19

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抗体制备服务

根据制备原理和方法，抗体制备服务可分为三类：多克隆抗体、单克隆抗体和基因工程抗体。

美迪西提供专业的多克隆抗体制备服务，配备经验丰富的技术团队和先进仪器设备，并采用成熟的制备技术。可根据客户需求定制个性化制备方案，常用实验动物包括兔、小鼠、大鼠等。

美迪西单克隆抗体制备服务包括：（1）免疫和ELISA检测：客户需提供蛋白或多肽（需与载体蛋白如KLH偶联），通常需要约4 mg蛋白抗原或5–10 mg多肽，用于免疫5只Balb/c小鼠，并通过ELISA检测抗体效价。（2）细胞融合与筛选：将小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞融合，获得杂交瘤细胞，并通过增殖培养及ELISA筛选高效价克隆。（3）亚克隆与结果交付：筛选优质克隆进行亚克隆及亚型鉴定，最终交付内容包括每个克隆的细胞株及5 mL培养上清。

基因工程抗体制备主要包括嵌合抗体、重组抗体及小分子抗体（如单链抗体）等类型。

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一、多克隆抗体制备服务

大多数天然抗原（如细菌、其分泌的外毒素以及各种组织成分等）通常含有多个不同的抗原决定簇，每个抗原决定簇均可刺激机体产生相应的特异性抗体。

多克隆抗体是机体在多个抗原决定簇刺激下，由多种免疫淋巴细胞分泌的多种抗体所组成的混合物。

抗体制备

多克隆抗体制备方法

由于多克隆抗体具有不均一性，其在抗体结构与功能研究以及临床应用中存在一定局限性，因此通常被称为第一代抗体。

二、单克隆抗体制备

在机体的淋巴组织中存在多种B细胞，每种B细胞仅识别特定的抗原决定簇。当受到相应抗原刺激后，该类B细胞会增殖并分化形成来源相同的细胞群体，即细胞克隆（clone）。

同一克隆的B细胞可合成并分泌在理化性质、分子结构、遗传标记及生物学特性等方面高度一致的抗体，这类抗体称为单克隆抗体（Monoclonal Antibody, mAb）。单克隆抗体仅针对特定抗原决定簇，具有特异性强、纯度高等特点，通常被称为第二代抗体。

1、优点

（1）无需完全纯化抗原即可获得高特异性抗体；

（2）效价高；

（3）特异性强、均一性好；

（4）产量高，可实现稳定持续生产。

2、单克隆抗体制备基本原理

传统体内免疫方法难以直接获得单克隆抗体。若能筛选出特定抗体的B细胞，并在体外进行培养扩增，则可获得具有明确特异性的单克隆抗体。

目前常用的方法是杂交瘤技术：将抗体分泌B细胞与骨髓瘤细胞融合，形成杂交瘤细胞。该细胞既具备骨髓瘤细胞的无限增殖能力，又保留B细胞分泌特异性抗体的功能。由单一细胞克隆产生的抗体具有高度均一性，因此称为单克隆抗体。

应用杂交瘤技术可获得针对大多数抗原的单克隆抗体，前提是该抗原能够在小鼠体内诱导产生抗体应答。

（1）DNA合成

　① 主要途径：参考生物化学，可被氨基喋呤(A)所阻断

　② 旁路途径：利用次黄嘌呤(H)和胸腺嘧啶核苷(T)合成DNA；该过程依赖于次黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖转移酶（HGPRT）和胸苷激酶（TK）。

（2）骨髓瘤细胞：通常来源于BALB/c小鼠，具有以下特点：不具备分泌抗体的能力；体外具有无限增殖能力；丧失合成HGPRT和TK的能力；只能通过主要途径合成DNA；在含有次黄嘌呤(H)、氨基喋呤(A) 、胸腺嘧啶核苷(T)的HAT培养基中不能生长。

（3）免疫淋巴细胞：通常来源于BALB/c小鼠的脾淋巴细胞，具有以下特点：具有合成抗体的能力；具有合成HGPRT和TK的能力；能通过主要途径和旁路途径合成DNA；HAT培养基中能生长，但短寿，只能存活几天，体外不具有无限生长繁殖的能力

（4）融合剂：Köhler和Milstein最早采用仙台病毒进行细胞融合。随后研究发现，聚乙二醇（PEG）具有更高的融合效率，且可避免病毒污染问题，因此被广泛应用。

（5）杂交瘤细胞：具有合成抗体的能力(从免疫淋巴细胞获得)；具有合成HGPRT和TK的能力(从免疫淋巴细胞获得)；能通过主要途径和旁路途径合成DNA；HAT培养基中能生长；体外具有无限生长繁殖的能力(从骨髓瘤细胞获得)。

（6）饲养细胞：单个或少量细胞在体外培养条件下难以存活，通常需要加入饲养细胞以提高细胞密度并提供生长因子，从而促进细胞存活和增殖。这类辅助细胞称为“饲养细胞”，常用的小鼠腹腔巨噬细胞或成纤维细胞。

3、单克隆抗体制备过程：

制备抗原 → 免疫动物 → 免疫脾细胞和骨髓瘤细胞的制备 → 细胞融合 → 杂交瘤细胞的选择培养 → 杂交瘤细胞的的筛选 → 杂交瘤细胞的克隆化 → 单克隆抗体的检定 → 杂交瘤细胞系的建立 → 单克隆抗体的大量制备（动物体内诱生法和体外培养法）

4、单克隆抗体的应用

（1）诊断试剂：用于多种病原体及肿瘤相关标志物的检测与诊断。

（2）治疗试剂：广泛应用于兽医及人类医学领域，包括传染病治疗、抑制器官移植排斥反应，以及自身免疫性疾病的治疗；同时也用于开发靶向治疗药物，如抗体偶联药物（ADC）等。

（3）检测试剂：用于病原体毒力因子的检测，以及免疫细胞和其他组织细胞表面分子的分析与鉴定。

三、基因工程抗体(genetically engineering antibody)

自1975年单克隆抗体杂交瘤技术问世以来，单克隆抗体已被广泛应用于疾病的诊断与治疗。然而，目前绝大多数单克隆抗体来源于小鼠，在临床重复给药过程中，机体易产生抗鼠抗体（HAMA反应），从而导致疗效降低甚至失效。因此，理想的治疗性抗体应为人源抗体，但人源杂交瘤技术尚未取得突破性进展。

目前较为有效的解决方案是开发基因工程抗体，以替代传统鼠源单克隆抗体用于临床。基因工程抗体兴起于20世纪80年代初，是利用DNA重组技术在分子水平对抗体基因进行切割、重组或修饰，或通过人工合成后导入宿主细胞表达，从而获得的一类新型抗体，通常被称为第三代抗体。

目前已成功开发的基因工程抗体包括嵌合抗体、重构抗体、小分子抗体等。