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实验类型 | 培养器皿 | 实验时间 | 受试物用量 |
标准Ames | 100mm细胞培养皿 | 两周 | 400mg |
Mini-Ames | 六孔细胞培养板 | 1周 | (1)80mg测试五个菌株 (2)30mg测试两个菌株 |
Micro-Ames | 24孔细胞培养板 | 1周 | 15mg |
Ames II | 384孔板 | 1周 | < 5mg |
受试物 | ![]() | 浇到平板,孵育48-72小时 | ![]() |
菌液 | |||
S9混合物/PBS | ![]() |
在Ames试验系统中,应选择至少5种测试菌株,通常包括:
TA1535
TA1537、TA97或TA97a
TA98
TA100
WP2 uvrA、WP2 uvrA(pKM101)或TA102
各菌株在编码组氨酸或色氨酸生物合成相关基因的操纵子区域中含有不同类型的突变,用于检测不同机制的致突变作用。
国外多数实验室常选用WP2菌株,而国内实验室则更常采用TA102菌株。
菌株 | 氨基酸标记物 | 其它相关突变 | 质粒 | |||
突变基因 | 突变类型 | 主要基因靶点 | 膜突变 | DNA修复 | ||
TA1535 | hisG46 | 碱基置换 | GC | rfa | UVrB | - |
TA1537 | hisC3076 | 移码 | GC | rfa | UVrB | - |
TA97 | hisD6630 | 移码 | GC | rfa | UVrB | pKM101 |
TA97a | hisD6631 | 移码 | GC | rfa | UVrB | pKM101 |
TA98 | hisD3052 | 移码 | GC | rfa | UVrB | pKM101 |
TA100 | hisG46 | 碱基置换 | GC | rfa | UVrB | pKM101 |
WP2 uvrA | trpE | 碱基置换 | AT | - | UVrA | - |
WP2 uvrA (pKM101) | trpE | 碱基置换 | AT | - | UVrA | pKM101 |
TA102 | hisG428 | 碱基置换 | AT | rfa | + | pKM101 pAQ1 |
Rfa膜突变的存在可增加细胞膜对大分子化学物质的通透性,从而提高受试物进入细胞的效率。
uvrB⁻菌株的切除修复功能存在缺陷,无法清除DNA加合物,使得这些菌株对多种致突变剂表现出更高的致突变性和细菌毒性敏感性。
质粒pKM101上含有muc⁺基因,该基因参与DNA损伤诱导的修复途径。在增强细菌对致突变剂毒性耐受性的同时,也提高了菌株的突变敏感性。因此,含有质粒pKM101的菌株自发回复突变菌落数相对较高。
TA1537、TA97和TA97a菌株均含有胞嘧啶重复序列,该序列位于组氨酸基因靶位点内的突变敏感区域。它们对能引起碱基缺失的移码型诱变剂具有相似的敏感性。
TA98和TA100对大多数致突变剂均较为敏感(有数据显示这两个菌株检测阳性的致突变剂占98%,因而在前期筛选试验中可以只采用这两种菌株进行检测。)
羟基蒽醌类化合物主要可由菌株TA1537检测到。
氧化型突变剂、DNA交联剂及联氨等则仅能被含有AT位点突变的菌株(TA102、WP2 uvrA或WP2 uvrA(pKM101))检测到。
菌株TA1535与TA100均在hisG46基因位点发生碱基置换型突变,区别在于TA100含有质粒pKM101,从而具有更高的突变敏感性。然而,专家组研究数据显示,在已知的659种致突变剂中,约有5%的受试物仅能被TA1535检测出,而无法通过TA100检测。
水:水溶性化合物
二甲基亚砜(DMSO):无水溶性化合物首选
乙醇
丙酮
不常用溶媒:设立平行阴性对照
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