美问必答-从经验出发，为你解答脂质体类药物生物分析难点？

脂质体类药物，作为现代医学的一大突破，不仅能显著提升药物的溶解度、稳定性和生物利用度，还能大幅降低对健康组织的毒副作用。从肿瘤治疗到疫苗输送，再到基因治疗，脂质体类药物的应用前景可谓广阔无垠。然而，这种创新疗法的前沿载体也带来了独特的挑战。脂质体类药物的生物分析是一个复杂而关键的过程，涉及结构分析、稳定性研究和药代动力学等多个层面。如何攻克这些难题？如何在实战中应对各种挑战？

云讲堂特邀脂质体领域的资深科研老师——练赛，凭借丰富的经验和独到的见解为您深度解析脂质体类药物生物分析的实战难题。

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1 怎么在方法开发阶段选择相应的SPE板？

练赛：我们首先要判断化合物的极性，对于弱酸、弱碱及中性化合物，建议选择硅胶基质的反向SPE板。适用于大多数小分子生物分析，比如Waters的HLB系列和Thermo Fisher的SOLA系列板。

对于强酸或强碱化合物，则需要考虑离子交换的SPE板。可以选择Waters的四合一离子交换开发的板，如适用于碱性化合物的Oasis MCX阳离子交换板，适合酸性化合物的MAX阴离子交换板，适合强碱性或季铵类化合物的WCX弱阳离子交换板，以及适合强酸化合物的WAX弱阴离子交换板。

此外，选择合适规格的板子也很重要，可以根据样品的载量（如2毫克、10毫克或30毫克）进行选择。

2 为什么在SPE活化和平衡阶段，使用葡萄糖注射液、血浆进行活化和平衡操作。是基于什么样的考虑？

练赛：在测定游离长春瑞滨的包封率时，我们发现测得的结果始终低于客户提供的值。这可能表明中间处理过程存在脂质体破碎或有蛋白质结合部分未能完全被淋洗出去的情况。因此，我们首先考虑处理可能的脂质体破碎问题，在上样操作之前额外添加葡萄糖进行预处理。

另一方面，如果固定相上硅胶基团与蛋白结合的部分没有完全洗脱，我们就考虑到用空白基质，进行预先占位，让后续蛋白结合的部分没有办法结合再固定相上。

3 为什么总的药物方法学验证和游离药物方法学验证标曲和质控的配制有那么多不同？

练赛：我们所有的样品都来自同一动物体，无论是总药物浓度还是游离药物浓度的测定，都基于同一样品。在测定总药物浓度时，样品中通常是存在脂质体。如果脂质体没有完全破碎的情况下，那么测定出的总药物浓度可能不准确。为了模拟样品中脂质体的真实情况，我们使用含有脂质体的质控样品来校正。只有当标准品和样品中的脂质体能够完全匹配时，才能准确反映出总的药物浓度是否完全破碎。

对于游离药物的测定，我们通过减去含脂质体的测定结果得出。然而，在最终的样品中，游离药物与脂质体同时存在，因此我们需要考虑脂质体的破碎和游离小分子的稳定性。为了模拟真实样品中的情况，我们需要引入同时含有脂质体和游离小分子的质控样品进行研究。

4 小鼠组织的检测 也是测总药和游离部分吗？

练赛：根据脂质体的指导原则，是建议说需要测总药和游离的，但是组织需要匀浆处理，往往是做不了游离测定，所以目前还是检测总药。

5 请问胶束注射液药物和脂质体药物一样需要同时测定总药和游离药物吗？可以同等方面去考虑吗？有没有什么不同呢？

练赛：胶束注射液和脂质体注射液等纳米药物在体内血浆药物浓度测定方面，是需要同等考虑的，都需要测定游离和总药物浓度。详见纳米药物非临床药代动力学研究技术指导原则。目前美迪西两个胶束注射液的项目经验，在游离和总药物浓度测定方法都是一样的，不同的就是前处理的分离手段。

6 添加保护剂葡萄糖的浓度和比例是如何优化并确定下来的?

练赛：通常选择是5%的葡萄糖，比例是按1:10去添加。如果保护程度不够，相应浓度可以提高，但是添加比例一般不要小于1:10。

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