蛋白酶制剂检测/酶活性分析测定

酶制剂检测原理

酶制剂检测应用酶对底物专一性的特点，采用高纯度底物，专一检测某种酶制剂对底物的降解，然后测定产物含量（分光光度计）。 
标准曲线：通过用其高纯度的产物制作标准曲线，通过分光光度计的读数查出对应的产物含量，然后计算酶活。

酶制剂是指从生物中提取的具有酶特性的一类物质，主要作用是催化食品加工过程中各种化学反应，改进食品加工方法。中国已批准的有木瓜蛋白酶、α—淀粉酶制剂、精制果胶酶、β—葡萄糖酶等6种。酶制剂来源于生物，一般地说较为安全，可按生产需要适量使用。检测酶制剂产品质量常用的指标一般是酶活性，但也不是唯一的指标。
我们提供酶制剂方面的检测：包括酶活、常规指标（水分、粒度等）、卫生指标（菌落总数、大肠杆菌、沙门氏菌等）。

可检测的酶制剂产品

美迪西专业提供各种酶制剂的检测服务：脂肪酶、木聚糖酶、歧化酶、纤维素酶、半纤维素酶、蛋白酶、β-葡聚糖酶、尿素酶、糖化酶、植酸酶、淀粉酶、果胶酶、木瓜蛋白酶、α—淀粉酶制剂、精制果胶酶、糖化酶、脂肪酶、角蛋白酶等。

蛋白质活性检测

常规的蛋白质质量分析手段包括SDS-PAGE蛋白质电泳分析、内毒素检测与控制、酶活性检测（终点法及动力学曲线）、基于细胞的蛋白质活性分析等。 

酶制剂检测相关标准

GB25594-2010  食品安全国家标准食品工业用酶制剂
NY/T722-2003  中华人民共和国农业行业标准　饲料用酶制剂通则　
QB1805.2一93  中华人民共和国轻工行业标准　工业用糖化酶制剂
GBT20370-2006  生物催化剂酶制剂分类导则
GB8275-2009  食品添加剂　α-淀粉酶制剂
GB274-87  食品添加剂固定化葡萄糖异构酶制剂
GB8276-2006  食品添加剂糖化酶制剂
QB1502-92  食品添加剂果胶酶制剂
GB20713-2006  食品添加剂a-乙酰乳酸脱羧酶制剂
QB1806一1993  洗涤剂用碱性蛋白酶制剂
NY/T722-2003  饲料用酶制剂通则
QB1805.2一93  工业用糖化酶制剂
QB1805.3-93  工业用蛋白酶制剂　
QB2525一2001  食品添加剂　α-葡萄糖转苷酶　
QB/T1804一1993  工业酶制剂通用检验规则　和标志、包装、运输、贮存
QB2526一2001  食品添加剂　真菌α-淀粉酶　
QB2583-2003  纤维素酶制剂　
QB/T2306一1997  耐高温α一淀粉酶制剂　
DB33/T459—2003  饲料添加剂饲料用复合酶制剂　
QB/T1803一1993  工业酶制剂通用试验方法　
GB/T18634一2002  饲用植酸酶活性的测定分光光度法　
GBT5522-2008  粮油检验粮食、油料的过氧化氢酶活动度的测定
GBT5523-2008  粮食、油料的脂肪酶活动度的测定
GBT5521-2008  谷物及其制品中α-淀粉酶活性的测定比色法
GBT21498－2008  大豆制品中胰蛋白酶抑制剂活性的测定
GB-T8622-1988  大豆制品中尿素酶活性测定方法
GBT5009.186-2003  乳酸菌饮料中脲酶的定性测定
GBT5413.31-1997 婴幼儿配方食品和乳粉脲酶的定性检验
GBT5009.183-2003 植物蛋白饮料中脲酶的定性测定
GBT17811-2008 动物性蛋白质饲料胃蛋白酶消化率的测定过滤法
GB05009-171 保健食品中超氧化物歧化酶（SOD）活性测定
GB/T5521-89 谷物和谷物产品α-淀粉酶活性的测定比色法
GB/T9826-88 小麦粉破损淀粉测定法　α-淀粉酶法
GB/T18932.16-2003 蜂蜜中淀粉酶值的测定方法分光光度法
GB/T22252-2008 保健食品中辅酶Q10的测定
NY/T911-2004 饲料添加剂　beta-葡聚糖酶活力的测定　分光光度法　
NY/T912-2004 饲料添加剂　纤维素酶活力的测定　分光光度法　
SB/T10317-1999 蛋白酶活力测定法
SN/T0800.3-1999 进出口粮食、饲料粗蛋白质检验方法　
SN/T0800.4-1999 进出口粮食、饲料尿素酶活性测定方法　
CNCA∕CTS0016-2008 调味品、发酵制品生产企业要求
WST66-1996 全血胆碱酯酶活性的分光光度测定方法羟胺三氯化铁法
WST67-1996 全血胆碱酯酶活性的分光光度测定方法硫代乙酰胆碱-联硫代双硝基苯甲酸法

酶活性检测服务特点

• 更短的检测周期-帮助客户快速获取精准检测结果
• 更低的检测费用-合理的收费体系降低客户测试服务成本
• 更完善的检测方案-为客户提供检测分析一站式服务
• 更优质的售后服务-帮助客户解决服务后期技术疑问

常见的酶活性测定方法

通常酶制剂活性的检测是采用实验室分析手段来进行评价，它可以用来筛选优质酶制剂、确定复合酶制剂的最佳组方及确定产品的最佳添加量等，酶制剂实验室评价技术是目前饲料厂家应用最为广泛的一种方法。其操作相对简单，检测所用时间短，便于生产实践应用。酶活测定结果虽不能完全反映酶的使用效果，但通过检测至少可以避免使用劣质的酶制剂。目前测定酶制剂活性的方法主要有：
1、比色法
比色法是以反应生成有色化合物的显色反应为基础，通过比较或测量有色物质溶液颜色深度来确定待测组分含量的方法，根据原理不同可分为还原糖法和色原底物法。
2、黏度法
这种方法是根据酶能够降低一定浓度的标准底物（控制pH值、温度等条件）的黏度的能力来确定酶的活性。利用的底物主要有化学合成的底物和自然提取的底物。测定的酶的活性值是通过与同时测定的标准酶活性的比较，来确定酶的活性。该法可用于木聚糖酶、β-甘露聚糖酶、β-葡聚糖酶等酶活测定。这种方法的特点是通过降低底物的粘度来反映酶的活性，这也正是酶在体内起作用的重要特征。该法虽然灵敏度较高，但重现性差，操作复杂费时，应用难于普及。
3、免疫学法
用于酶活性分析的免疫学法包括ELISA法和免疫凝胶扩散法。这两种方法是根据酶与抗体之间发生反应，然后ELISA法通过第二步反应，凝胶扩散法则通过印染过程来确定酶的活性。
这些方法非常灵敏，能够检测到极低水平的酶蛋白。但它们的缺点是对于每个产品的酶需要特殊的抗体，另外抗体能够与非酶蛋白质发生反应。由于抗体本身所用的蛋白质是特定的，因此，由不同生产者生产的同种类型的酶之间是没有交叉性的。另外，采用实验动物的敏感性也值得探讨。
4、凝胶扩散法
这种方法是将酶作用的底物与某种凝胶混合后倒入培养皿中，凝固之后，在凝胶上切开一条凿，倒入标准酶液和测试酶液。培养一定时间后，在切开的凝胶周围能够看到水解区域，区域的大小与酶的含量成正比。在某些情况下，还可以再加入其他试剂来显示水解的区域。如木聚糖酶活力的测定。
这种方法虽然简单，但培养时间长。因为这种方法是根据区域的大小来确定酶的活性，所以其准确性要低于其他非扩散的方法。
5、比浊法
以酵母或酵母细胞壁在缓冲溶液中的浊度或吸光度的降低来表示酶活力，如β-葡聚糖酶活力的测定。
6、体外模拟消化技术
酶活测定毕竟不能反映外源酶在机体内真实的作用效果，因此，对于体外法评定饲料营养价值的研究不断增加。体外法评定饲料营养价值是通过模拟消化道内温度、pH、消化酶分泌、胃肠运动和养分吸收等参数，在体外建立一套与畜禽消化道内环境接近的操作程序，对饲料及酶制剂进行营养价值预测和评定。常用的体外模拟消化技术包括：①胃蛋白酶—胰酶法；②胃蛋白酶—小肠液法；③胃蛋白酶—胰酶—瘤胃液法；④胃蛋白酶—胰酶—碳水化合物酶法。