蛋白分离纯化方法

2015-07-29

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为了进行离体(invitro)研究，必须先将目的蛋白质从其他细胞组分中分离提纯出来。这一过程通常从细胞裂解开始（对于分泌性蛋白质的提纯则不需要裂解细胞），通过破坏细胞膜将细胞内含物释放到溶液中，从而获得含有目的蛋白质的细胞裂解液。然后通过超速离心将细胞裂解液中膜脂和膜蛋白、细胞器、核酸以及含有可溶蛋白质的混合物。

对于天然蛋白质，可能需要一系列的纯化步骤才能获得纯度足以用于实验室应用的蛋白质。为了简化这一过程，通常采用基因工程的手段在目的蛋白质上添加一些化学特性，在不改变其结构和生物学活性的情况下使纯化过程更为简单。通常是将含有特定氨基酸序列的“标签”连接在目的蛋白质的N-端或C-端。例如，含有连续多个组氨酸的序列，称为组氨酸标签；将含有带组氨酸标签蛋白质的裂解液流过含有镍的亲和层析柱，组氨酸就可以与镍螯合从而结合在柱子上，而裂解液中其他蛋白质由于没有组氨酸标签而直接流出柱子，从而达到分离目的。通过基因工程（即DNA重组）改造而获得的蛋白质被称为重组蛋白质。

蛋白质的分离纯化方法

（1）根据分子大小不同进行分离纯化。蛋白质是一种大分子物质，并且不同蛋白质的分子大小不同，因此可以利用一些较简单的方法使蛋白质和小分子物质分开，并使蛋白质混合物也得到分离。根据蛋白质分子大小不同进行分离的方法主要有透析、超滤、离心和凝胶过滤等。

（2）根据溶解度不同进行分离纯化。影响蛋白质溶解度的外部条件有很多，比如溶液的pH值、离子强度、介电常数和温度等。但在同一条件下，不同的蛋白质因其分子结构的不同而有不同的溶解度，根据蛋白质分子结构的特点，适当地改变外部条件，就可以选择性地控制蛋白质混合物中某一成分的溶解度，达到分离纯化蛋白质的目的。常用的方法有等电点沉淀和pH值调节、蛋白质的盐溶和盐析、有机溶剂法、双水相萃取法、反胶团萃取法等。

（3）根据电荷不同进行分离纯化。根据蛋白质的电荷即酸碱性质不同分离蛋白质的方法有电泳和离子交换层析两类。电泳是在外电场的作用下，带电颗粒（如不处于等电点状态的蛋白质分子）将向着与其电性相反的电极移动的现象。聚丙烯酰胺电泳是一种以聚丙烯酰胺为介质的区带电泳，常用于分离蛋白质。离子交换层析是以离子交换剂为固定相，依据流动相中的组分离子与交换剂上的平衡离子进行可逆交换时结合力大小的差别而进行分离的一种层析方法。

（4）利用对配体的特异亲和力进行分离纯化。亲和层析是利用蛋白质分子对其配体分子特有的识别能力建立起来的一种有效的纯化方法。近年来，亲和层析技术被广泛应用于融合蛋白的分离纯化上，因为融合蛋白具有特异性结合能力。但是在实际工作中，很难用单一方法实现蛋白质的分离纯化，往往要综合几种方法才能提纯出一种蛋白质。理想的蛋白质分离提纯方法，要求产品纯度和总回收率越高越好，但实际上两者难以兼顾。随着生物分离技术的发展、新的生物分离技术的不断出现，为蛋白质的分离纯化提供了许多新的方法和途径。

蛋白纯化技术（联系更多服务项请发邮件到：marketing@medicilon.com.cn）

分类选项：12-Tube Magnet 用于在1.5 ml或2 ml管中分离磁性颗粒

详细信息：12-Tube Magnet可用于6xHis-tagged蛋白磁捕获实验，或配合Ni-NTA Magnetic Agarose Beads用于纯化实验。该磁块由12个强力的NdFeB（钕铁硼）磁盘组成。每个磁盘可吸引相邻孔中的1.5 ml或2 ml管中的磁珠。捕获6xHis-tagged蛋白后，磁珠被吸到管子的一端，这时可更换缓冲液。磁珠可远离磁场进行重悬，实现彻底洗涤。

分类选项：15 ml/50 ml Tube Magnet 用于分离5 x 15 ml或3 x 50 ml管中的磁性颗粒

详细信息：15 ml/50 ml Tube Magnet是一个方便的分离装置，适用于在15 ml或50 ml管中分离细胞、磁捕获或与BioMag磁珠配合进行免疫分析。磁珠在磁场作用下被吸到管的一端，吸引力大于20 megaoersted，在更换或倒出缓冲液时磁珠会停留在被吸引的位置。去除磁场后可便利的重悬磁珠。

分类选项：Albumin Affinity Cartridges 用液相色谱体系去除人类和小鼠血浆和血清样本中的白蛋白

详细信息：有效去除白蛋白，有助于低丰度蛋白的分析
使用固定的单克隆抗体对高丰度蛋白进行高特异性的去除
新型设计滤筒，操作方便快速
Albumin Affinity Cartridges预装有结合在树脂上的固定单克隆抗体，可利用液相色谱原理，去除人类和小鼠血浆和血清样本中的白蛋白。有助于富集低丰度蛋白，进行分析。
操作流程：稀释的样本缓慢流过滤筒，在此过程中白蛋白与树脂上固定的单克隆抗体结合。流出液中的血浆或血清蛋白不含白蛋白，此流出液可收集以备分析之用。如果需要，可使用pH值为2的甘氨酸缓冲液将白蛋白和相关蛋白从树脂上洗脱。
应用：Albumin Affinity Cartridges可快速、特异性去除人类或小鼠血浆和血清样本中的白蛋白，有助于低丰度蛋白的分析。

分类选项：Albumin/IgG Depletion Cartridge 用液相色谱体系去除人类血清和血浆中的IgG和白蛋白

详细信息：有效去除人类血浆和血清样本中的IgG和白蛋白
有助于低丰度的血浆或血清蛋白的分析
固定的单克隆抗体高特异性去除IgG和白蛋白
新型设计滤筒，操作方便快速
Albumin/IgG Depletion Cartridges预装有结合在树脂上的固定单克隆抗体，可利用液相色谱去除人类血浆和血清样本中的白蛋白和IgG。有助于富集低丰度蛋白，进行分析。
操作流程：稀释的样本缓慢流过滤筒，在此过程中白蛋白和IgG与树脂上固定的单克隆抗体结合。流出液中的血浆或血清蛋白不含白蛋白和IgG，收集流出液以备分析之用。如果需要，可使用pH值为2的甘氨酸缓冲液将白蛋白、IgG和相关蛋白从滤筒中的树脂上洗脱。
应用：Albumin/IgG Depletion Cartridges可快速、特异性去除人类血浆和血清样本中的白蛋白和IgG，有助于低丰度蛋白的分析。

分类选项：Allprotect Tissue Reagent 迅速稳定组织中的DNA、RNA和蛋白质

详细信息：无需液氮或干冰
立即方便地稳定收集到的组织
可长期储存组织，用于后续分析
标准的样本制备流程，用于系统生物学研究
Allprotect Tissue Reagent可在室温下立即稳定组织样本中的DNA、RNA和蛋白质。这样可以稳定DNA、RNA和蛋白质，以保证可靠的下游分析。稳定后的组织可在15–25°C运输7天，2–8°C储存长达12个月，在–20°C或–80°C可储存更长时间。
操作流程：稀释的样本缓慢流过滤筒，在此过程中白蛋白和IgG与树脂上固定的单克隆抗体结合。流出液中的血浆或血清蛋白不含白蛋白和IgG，收集流出液以备分析之用。如果需要，可使用pH值为2的甘氨酸缓冲液将白蛋白、IgG和相关蛋白从滤筒中的树脂上洗脱。
应用：Albumin/IgG Depletion Cartridges可快速、特异性去除人类血浆和血清样本中的白蛋白和IgG，有助于低丰度蛋白的分析。

蛋白纯化服务联系方式

Email: marketing@medicilon.com.cn

网站: www.medicilon.com.cn

电话：021-58591500

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