美迪西细胞实验服务外包

上海美迪西的生物部在分子生物学、细胞生物学、体外生物学和结构生物学领域有丰富的经验。从最初的cDNA文库构建到药物设计，通过蛋白质纯化，结构测定和分析测定，提供一套完整的生物学服务。

细胞实验技术服务主要内容

稳定细胞株筛选服务内容和流程：1)常规细胞：a. 杀伤曲线绘制；b. 转染质粒，铺板，用不同的抗生素浓度筛选细胞单克隆；c. qPCR或Western Blot检测稳定克隆的外源基因表达水平。2)特殊细胞：a. 根据细胞特点、实验特点或实验需求，设计实验方案并与客户探讨确定实验方案；b. 预实验，通过转染含有GFP报告基因的质粒确定最佳转染试剂，并优化转染条件；c. 杀伤曲线绘制；d. 转染质粒，铺板，用不同的抗生素浓度筛选细胞单克隆；e. qPCR或Western Blot检测稳定克隆的外源基因表达水平。

原代细胞分离实验:常规细胞培养实验和构建细胞模型，进行形态学、基因水平和蛋白质（组）水平的实验。服务内容：细胞原代培养、细胞传代培养、3D细胞培养。实验周期：视具体实验定。

细胞转染实验服务内容和流程：1）质粒：a. 进行预实验，通过转染含有报告基因的质粒优化转染条件；b. 转染条件确定后，按照客户方案进行转染；c. qPCR或Western Blot检测转染效率。2）SiRNA：a. 根据基因序列，设计并合成siRNA；b. 进行预实验，通过转染带有荧光标记的阴性对照siRNA优化转染条件；c. 通过qPCR和Western Blot验证siRNA的沉默效率，筛选siRNA最佳使用浓度。

细胞活力检测(MTT法):在细胞群体中总有一些因各种原因而死亡的细胞，总细胞中活细胞所占的百分比叫做细胞活力。噻唑兰，简称MTT，可透过细胞膜进入细胞内，活细胞线粒体中的琥珀脱氢酶能使外源性MTT还原为难溶于水的蓝紫色的Formazan结晶并沉积在细胞中，结晶物能被二甲基亚砜（DMSO）溶解，用酶联免疫检测仪在490nm波长处测定其光吸收值，可间接反映细胞数量。

细胞凋亡实验:细胞凋亡是指为维持内环境稳定，由基因控制的细胞自主的有序的死亡。细胞凋亡与细胞坏死不同，细胞凋亡不是一件被动的过程，而是主动过程，它涉及一系列基因的激活、表达以及调控等的作用；它并不是病理条件下，自体损伤的一种现象，而是为更好地适应生存环境而主动争取的一种死亡过程。

流式细胞检测:流式细胞术（Flow Cytometry，FCM）是一种对液流中排成单列的细胞或其它生物微粒（如微球，细菌，小型模式生物等）逐个进行快速定量分析和分选的技术。该技术广泛的运用于从基础研究到临床实践的各个方面，涵盖了细胞生物学、免疫学、血液学、肿瘤学、药理学、遗传学及临床检验等领域。

耐药株诱导实验:采用体外低浓度梯度递增联合大剂量间断冲击方法诱导肿瘤细胞对药物产生耐药性。诸如：人乳腺癌阿霉素耐药细胞株、人乳腺癌紫杉醇耐药株、人肺腺癌紫杉醇耐药株、人肝癌氟尿嘧啶耐药株、人结肠癌长春新碱耐药株、人口腔上皮癌长春新碱耐药株、人结肠癌紫杉醇耐药株、人结肠癌氟尿嘧啶耐药株、人卵巢癌顺铂耐药株、人白血病阿霉素耐药株、人卵巢癌紫杉醇耐药株、人胃癌顺铂耐药株、人白血病阿霉素耐药株、人乳腺癌阿霉素耐药细胞株、人结肠癌长春新碱耐药株、人肝癌氟尿嘧啶耐药株、人乳腺癌抗雌激素耐药株、人乳腺癌Tamoxifen耐药株、小鼠激素依赖性乳腺癌细胞等。

原代/传代细胞培养（Primary/continuoua cell culture）:细胞的生长需要营养环境，用于维持细胞生长的营养基质称为培养基。培养基按其物理状态可分为液体培养基和固体培养基。从多细胞生物中分离所需要细胞和扩增获得的细胞以及对细胞进行体外改造，观察，必须解决细胞离体培养问题，同微生物细胞培养的难易相比，比较困难的是来自多细胞生物的单细胞培养，特别是动物细胞的培养。

细胞活力检测（Cell viability test）:活细胞中的脱氢酶能将MTT还原成不溶于水的蓝紫色产物（甲臜，Formazan），并沉淀在细胞中，而死细胞没有这种功能。二甲亚砜（DMSO）能溶解沉积在细胞中的蓝紫色结晶物，溶液颜色深浅与所含的Formazan量成正比，最后用酶标仪测定OD值。

稳定转染（Stable transfection）:稳定转染或持久的转染是用于建立克隆的细胞系，这种细胞系中转染的目的基因整合到染色体DNA中并指导适量目的蛋白的合成。一般来说（由细胞类型决定），形成稳定转染细胞的效率比瞬时转染的效率低1到2个数量级。利用可选择的遗传标记物有利于从非转染细胞的毕竟中分离出稀少的稳定转染物。

瞬时转染（Transient transfection）:采用瞬时转染的方法能够方便快捷地对基因功能进行研究与分析，且基因表达水平高，但通常只持续几天，多用于启动子和其他调控元件的分析。一般来说，超螺旋质粒DNA转染效率较高，在转染后24-72小时内（依赖于各种不同的构建）分析结果，常常用到一些报告系统如荧光蛋白，β半乳糖苷酶等来帮助检测。

细胞实验服务常用的实验室装备

细胞学在生命科学科中起着至关重要的作用，近年来细胞学蓬勃发展，并取得了重大的进展，细胞实验室的构建也是各个细胞实验服务公司或者院校必备的实验室。以下是部分实验室仪器设备：

一、CO2培养箱

CO2培养箱是细胞培养的必备仪器，它为细胞提供了一个体外培养的舒适环境，如适宜的温度、湿度、酸碱度、O2浓度等，主要应用于组织工程、体外受精、神经系统科学、癌症研究和其他哺乳动物细胞研究等。细胞在体外培养时很容易受到各种细菌、微生物的感染，因此，CO2培养箱的灭菌和抑菌能力就显得尤为重要。

ESCOCelCulture系列CO2培养箱具有稳定的培养环境、专业的灭菌功能和独特的抑菌功能。如90℃，14Hour即可完成湿热灭菌过程，能有效杀死各种微生物；Ulpa过滤器，腔体内达到5级空气质量；不锈钢抛光内胆，有效抑制微生物附着；ESCO专利ISOCIDETM表面抗菌涂层技术可有效地意识微生物在箱体表面滋生，实验证明，24小时内，消除箱体表面的99.9%的细菌。可靠的性能，简洁的操作，完美的设计，为各种类型细胞提供最佳的培养条件，讲帮助您的科学梦想变成现实更近一步！
二、超净工作台/生物安全柜
细胞培养对无菌环境要求很高，在细胞操作时，一般需要在100级空气质量条件下进行，因此超净工作台或生物安全柜就必须配备。

新加坡ESCO超净工作台和生物安全柜，为您提供更加安全的防护。

三、纯水系统
体外培养的细胞对水质特别敏感，对水的纯度要求较高。培养用水中如果含有一些杂质，即使含量极微，有时也会影响细胞的存活和生长，水中的内毒素直接参与细胞凋亡，内毒素含量越低，对细胞毒性越小，越利于细胞的生长和传代；内毒素含量过高，会直接导致细胞提前老化，甚至导致细胞死亡。用金属蒸馏器制备的蒸馏水，可能会含有某些金属离子，一般不作为培养用水。配制培养用液应使用经石英玻璃蒸馏器三次蒸馏的三蒸水或超纯水净化装置制备的超纯水。
美国密理博Millipore公司成立于1945年，总部在美国麻省波士顿，在全世界三十多个国家和地区有子公司和办事处，为一百多个国家和地区提供产品和技术服务。目前公司全球雇员超过5,800人。自上世纪六十年代起，密理博就已经开始致力于实验室用纯水系统的研究和开发，为世界各地高校和临床、制药实验室提供日产几升至几千升的超纯水(I级)、分析级水(II级)和实验室级水(III级)纯化系统。多年来，Milli-Q、Elix、Super-Q、RiOs、Direct-Q和Simplicity等品牌在各类科学文献中随处可见，已经成为全球科研工作者心目中的权威品牌。
四、液氮罐
为了保存细胞，特别是不易获得的突变型细胞或细胞株，要将细胞冻存。冻存的温度一般为液氮温度-196℃，因此，需要液氮罐。在此环境中，一般细胞可以保存十年具有活性。

MVE XC系列液氮罐的容量自700 – 5000管及150至1000多个冻存管。产品持久耐用、重量轻，制造技术世界领先，并有5年的真空保证。

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