稳定细胞株构建筛选公司

    上海美迪西生物医药股份有限公司提供从动物模型到细胞功能检测的全程技术服务，拥有专业的稳定细胞株构建人员，在细胞功能检测领域可以进行细胞迁移、侵袭、凋亡、周期、增殖检测、细胞药物筛选等技术服务。稳定表达细胞株指在细胞中持续稳定表达特定基因或干扰特定基因表达。稳转细胞株的目的基因质粒DNA整合到细胞染色体上，使细胞长期稳定表达该基因或持续干扰目的基因。

稳定细胞株服务项目
1、基因过表达稳转细胞细胞系构建服务（基因过表达多克隆细胞株构建服务、基因过表达单克隆细胞株构建服务）：因过表达细胞株构建服务包括目的基因过表达慢病毒载体构建、病毒包装、细胞转染和筛选。您只需提供目的基因的cDNA质粒和需要构建的细胞系，我们将按照您的要求完成目的基因过表达细胞株的构建和检测，提供给您高质量的基因过表达稳定细胞株。
2、RNAi基因敲减稳转细胞株筛选服务（RNA干扰基因敲减细胞株多克隆构建服务、RNA干扰基因敲减细胞株单克隆构建服务）：  英茂盛业的RNAi基因敲减细胞系构建基于慢病毒表达系统，一般采用U6启动子驱动的pLVshRNA-puro或pLVshRNA-EGFP(2A)puro载体构建RNA干扰稳定细胞株，服务内容包括干扰载体构建、靶点筛选、干扰效率验证及稳定细胞筛选和克隆。

    3、CRISPR基因敲除稳定细胞株构建服务：随着talen和Cas9/gRNA基因敲除系统的出现，基因定点敲除的难度大幅下降。全新的技术将基因敲除从价格高昂，耗时漫长的ZNF系统，逐渐变成简便的研究工具。现在我们可提供Talen和Cas9/gRNA两个系统的基因敲除服务。包括基因敲除靶点设计，talen质粒组装，Cas9/gRNA质粒构建及基因敲除效率验证。 

稳定转染细胞株服务流程
a、载体构建：将外源基因构建到合适的载体上。
b、细胞筛选浓度测定：以10-14天细胞全部死亡的抗生素浓度为筛选浓度。
c、细胞接种：转染实验前天接种细胞，各种细胞的平板密度依据各种细胞的生长率和细胞形状而定。进行转染当天细胞应达到60%-80%覆盖。
d、细胞转染：用构建好的载体转染目的细胞。
e、使用抗生素对细胞进行筛选。
f、筛选结果鉴定。

稳定细胞株筛选方法

    1、转染质粒后，单克隆方法筛选稳定细胞系：对大多数细胞转染效率较低。对于基因过表达，如果转染效率达到40%，基因过表达尚可。但是对于基因干扰实验，对转染效率要求远远高于基因过表达，通常质粒转染无法满足。

另外，质粒游离于细胞质中，很快降解，无法满足较长时间的检测项目；质粒转染整合几率极低，稳定细胞株构建耗时耗力，且得率很低，往往需要挑取单克隆株。
2、病毒感染筛选稳定细胞株：病毒感染方法较质粒转染筛选单克隆方法更方便和高效，是目前主流的稳定细胞系筛选方法。用慢病毒制备稳转细胞株，由于其高效整合、高效转录、高效表达、宿主范围广，感染效率高，且与细胞染色体整合而不发生基因重排，是制备稳定细胞株的理想载体。

服务特点
1、稳定：保证15代以内稳定转染细胞稳定表达。
2、迅速：一般控制在1个月以内完成构建。
3、经济：价格实惠，性价比高。
4、质量保证：对外源基因进行严格鉴定。

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