细胞转染技术服务

细胞转染是指将外源分子如DNA，RNA等导入真核细胞的技术。随着分子生物学和细胞生物学研究的不断发展，转染已经成为研究和控制真核细胞基因功能的常规工具。在研究基因功能、调控基因表达、突变分析和蛋白质生产等生物学试验中，其应用越来越广泛。

技术内容：将外源分子如DNA,RNA等导入真核细胞 

研究内容：研究和控制真核细胞基因功能 

应用：基因功能、调控基因表达、突变分析和蛋白质生产等生物学试验

细胞转染的分类

1、瞬时转染：外源DNA/RNA不整合到宿主染色体中，因此一个宿主细胞中可存在多个拷贝数，产生高水平的表达，但通常只持续几天，多用于启动子和其他调控原件的分析。一般来说，超螺旋质粒DNA转染效率较高，在转染后24-72小时内分析结果，常常用到一些报告系统如荧光蛋白，β半乳糖苷酶等来帮助检测。

目的：快速分析

筛选方法：抗生素抗性

表达持续时间：随细胞分裂而稀释至丢失48－72小时 

目的DNA与宿主染色体：未整合

2、稳定转染：外源DNA既可以整合到宿主染色体中，也可能作为一种游离体存在。尽管线性DNA比超螺旋DNA转入量低但整个率高。外源DNA整合到染色体中概率很小，大约1、104转染细胞能整合，通常需要通过一些选择性标记，如来氨丙基转移酶，潮酶素B磷酸转移酶，胸苷激酶等反复筛选，得到稳定转染的同源细胞系。

目的：为获得稳定表达外源基因的单细胞克隆 

筛选方法：抗生素抗性

表达持续时间：随宿主细胞本身基因组一样复制，转录，翻译，并被稳定遗传 

目的DNA与宿主染色体：未整合

常见细胞转染方法介绍

1、DEAE-葡聚糖法

是最早应用哺乳动物细胞转染的试剂之一。DEAE-葡聚糖是阳离子多聚体,它与带负电的核酸结合后接近细胞膜而被摄取。DEAE一葡聚糖转染已成功地应用于瞬时开始，但用于稳定转染却不可靠。

2、磷酸钙共沉淀转染法

由于试剂易得、价格便宜而被广泛用于瞬时转染和稳定染的研究。方法是，先将DNA和氯化钙混合，然后加人到PBS中慢慢形成DNA磷酸钙沉淀，后把含有沉淀的混悬液加到培养的细胞上，通过胞膜的内吞作用摄人DNA。

3、脂质体介导法（目前应用最广泛）

原理：阳离子脂质体试剂与DNA混合后，形成一种稳定的脂质双层复合物，DNA被包在脂质体中间，这种脂质双层复合物可直接加到培养的细胞中，脂质体粘附到细胞表面并与细胞膜融合，DNA被释放到胞浆中。

【主要应用】:瞬时转染  稳定转染. 

【特点】：使用方法简单，可携带大片段DNA，通用于各种类型的裸露DNA或RNA，能转染各种类型的细胞，没有免疫原性。虽在体外基因转染中有很高的效率，但在体内，能被血清清除，并在肺组织内累积，诱发强烈的抗炎反应，导致高水平的毒性，很大程度上应用受限制。

4、物理方法(电穿孔、显微注射及基因枪)

脂质体介导法实验方法介绍

细胞转染Lipofectamine 2000转染试剂：以HEK193细胞为例：

转染前一天，将细胞铺到培养皿中，

加入有血清无双抗的培养基（15ml）；

24小时候换上无血清无双抗的培养基12ml；

将所需的质粒用1.5ml无血清无双抗的培养基稀释；取40ul的Lipofectamine 2000加入无血清无双抗的培养基稀释，室温放置5min；

5min后将质粒和Lipofectamine 2000混合在一起，室温放置20min后加入培养皿中，4h后换上完全培养基48h培养；

注：24h看一次，如果培养基变颜色换培养基。

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